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junghyun0 committed Oct 17, 2023
1 parent 8e21063 commit 5ec6c03
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Expand Up @@ -131,15 +131,14 @@ P_{e} = C\ \times \left\lbrack - Ln\mspace{6mu}\left( 1 - \frac{\lbrack drug\rb
\end{equation}
```

- [drug]~equilibrium~ = [drug]~donor~ V~D~ + [drug]~acceptor~ x V~A~ /
- (V~D~ + V~A~)\
- C = V~D~ × V~A~ / (V~D~ + V~A~) × t × A\
- V~D~ = volume of donor compartment\
- V~A~ = volume of acceptor compartment\
- A = filter area\
- t = incubation time (in seconds)\
- [drug]~acceptor~ = Concentration of compound in the acceptor compartment at the assay completion\
- [drug]~donor~ = Concentration of compound in the donor compartment at the assay completion\
- [drug]~equilibrium~ = [drug]~donor~ V~D~ + [drug]~acceptor~ x V~A~ / (V~D~ + V~A~)
- C = V~D~ × V~A~ / (V~D~ + V~A~) × t × A
- V~D~ = volume of donor compartment
- V~A~ = volume of acceptor compartment
- A = filter area
- t = incubation time (in seconds)
- [drug]~acceptor~ = Concentration of compound in the acceptor compartment at the assay completion
- [drug]~donor~ = Concentration of compound in the donor compartment at the assay completion
- [drug]~equilibrium~ = Concentration of compound at theoretical equilibrium

별도의 세포배양 과정이 필요 없고, 약물의 농도를 UV plate reader를
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40 changes: 20 additions & 20 deletions 04.Rmd
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Expand Up @@ -296,26 +296,6 @@ knitr::include_graphics('media-04/image25.png')

### 대사안정성(metabolic stability) 평가 실험

신약개발 시 후보물질 도출을 위한 초기 단계에 많이 활용된다. 일반적으로
microsome을 이용하지만, 평가하고자 하는 목적에 따라 다른 실험계를 선택할
수 있다. Microsome을 이용할 경우, 첨가하는 cofactor와 chemical inhibitor
종류 및 pre-incubation 조건에 따라 다양한 효소의 대사능을 선택적으로
관찰할 수 있다. 각 실험 조건에 맞게 약물이 들어있는 시험관을 준비하여,
37℃에서 incubation 하면서 시간에 따라 시험관내의 약물의 농도를 측정하여
사라지는(대사되는) 약물의 양을 확인한다. 표 \@ref(tab:table04-04)를 자세히
살펴보자. G1은 평가약물과 buffer만 있으므로, 약물이 실험에 사용되는
buffer에서 chemical degradation이 있는지 확인하는 대조군이다. G2는
buffer와 microsome을 포함하고 있으며, cofactor 없이 가수분해가 가능한 ES
및 CES에 의한 대사를 관찰할 수 있다. G3은 G2에 NADPH를 추가하였으며, 이
경우는 가수분해효소 외 CYP와 FMO에 의한 대사를 관찰할 수 있다. G4는 G2에
NADPH 대신 UDPGA (+alamethicin)을 첨가하였으며, 이는 UGT에 의한 대사를
관찰하기 위함이다. G1\~G4의 조건은 대사안정성 실험시 필수적으로 포함하여
수행하기를 권장하며, 여기에 더하여, FMO 대사 가능성이 있다면, G5와 G6
실험을 추가하는 것을 추천한다. G5는 45℃에서 30분간 pre-incubation하여
열에 약한 microsome 내의 FMO를 비활성화 시키게 되며, G6는 CYP 동효소의
chemical inhibitor인 SKF525A를 첨가하여, CYP에 의한 대사능을 배제시킬 수
있다.

Table: (\#tab:table04-04) 대사안정성 평가 실험법의 예

+------------+--------+--------+--------+--------+--------+--------+
Expand Down Expand Up @@ -343,6 +323,26 @@ Table: (\#tab:table04-04) 대사안정성 평가 실험법의 예
| | | | FMO | | | |
+------------+--------+--------+--------+--------+--------+--------+

신약개발 시 후보물질 도출을 위한 초기 단계에 많이 활용된다. 일반적으로
microsome을 이용하지만, 평가하고자 하는 목적에 따라 다른 실험계를 선택할
수 있다. Microsome을 이용할 경우, 첨가하는 cofactor와 chemical inhibitor
종류 및 pre-incubation 조건에 따라 다양한 효소의 대사능을 선택적으로
관찰할 수 있다. 각 실험 조건에 맞게 약물이 들어있는 시험관을 준비하여,
37℃에서 incubation 하면서 시간에 따라 시험관내의 약물의 농도를 측정하여
사라지는(대사되는) 약물의 양을 확인한다. 표 \@ref(tab:table04-04)를 자세히
살펴보자. G1은 평가약물과 buffer만 있으므로, 약물이 실험에 사용되는
buffer에서 chemical degradation이 있는지 확인하는 대조군이다. G2는
buffer와 microsome을 포함하고 있으며, cofactor 없이 가수분해가 가능한 ES
및 CES에 의한 대사를 관찰할 수 있다. G3은 G2에 NADPH를 추가하였으며, 이
경우는 가수분해효소 외 CYP와 FMO에 의한 대사를 관찰할 수 있다. G4는 G2에
NADPH 대신 UDPGA (+alamethicin)을 첨가하였으며, 이는 UGT에 의한 대사를
관찰하기 위함이다. G1\~G4의 조건은 대사안정성 실험시 필수적으로 포함하여
수행하기를 권장하며, 여기에 더하여, FMO 대사 가능성이 있다면, G5와 G6
실험을 추가하는 것을 추천한다. G5는 45℃에서 30분간 pre-incubation하여
열에 약한 microsome 내의 FMO를 비활성화 시키게 되며, G6는 CYP 동효소의
chemical inhibitor인 SKF525A를 첨가하여, CYP에 의한 대사능을 배제시킬 수
있다.

위의 방법을 통해 수행된 실험 결과는 그림 \@ref(fig:04-07)와 같이 얻을 수 있다. 각
군에서 특정 대사효소에 의해 대사가 일어난 경우, 시간에 따라 약물의
농도가 줄어들기 때문에, 표 \@ref(tab:table04-04)의 G6과 같은 결과가 나타나며, 그렇지
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